Biozol RNA 提取试剂

Biozol RNA 提取试剂：

产品简介
Biozol 可从各种真核培养细胞，动物组织，细菌植物和真菌中快速高效提取总RNA，整个实验可控制在30分钟内。通常情况下可单次处理1 x 10⁶个真核细胞，1 x 10⁹ 个细菌细胞，100 mg 动物或植物组织。如果你要进行全血RNA提取的话，可以使用本试剂盒，不过我们建议使用Ezgene^TM Blood RNA Kit (product # R6411)这个专门设计来用于全血RNA提取的试剂盒，Ezgene^TM Blood RNA Kit可以很好的溶血，并去除血红素，提高RNA的得率。
本试剂盒纯化的RNA可用于RT-PCR, Northern 杂交，mRNA纯化，体外翻译等下游实验。
原理
细胞或组织经Biozol裂解，试剂中的成分会抑制RNase活性。加入氯仿抽提，裂解液将分为水相和有机相。RNA存在于水相中，用异丙醇处理水相后,经过75%酒精的洗涤，室温晾干或真空干燥后用DEPC水洗脱就能得到高质量的RNA。
贮存条件及其稳定性
Biozol 试剂保存于4℃。该产品可保证在购买之日起至少24 个月內有效。
产品组分

Catalog #	R1020-00	R1020-01	R1020-02
Biozol 溶液	10mL	100 mL	100 mL x 5
说明书	1	1	1

注：Biozol  溶液包含异硫氰酸胍和苯酚，实验时请格外小心。
即日起为方便客户使用，Biozol溶液改为红色。
RNA提取操作步骤
真核细胞和组织RNA提取步骤
1. 用1 mL Biozol 试剂 裂解细胞或组织
1 mL Biozol溶液可以充分裂解10⁷个细胞，或是100mg剪碎的组织（30 mm³）        
对于单层培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等）
按下面的方法在培养瓶中直接裂解细胞：尽量吸干培养基，然后直接将Biozol 溶液加入到培养皿。用裂解液吸打培养皿上面的细胞，使全部细胞都裂解。转移裂解液到1.5mL的离心管。（这个办法比用胰酶消化收集细胞好一些，因为这样可以最大限度降低RNA酶对RNA的降解。）
对于悬浮培养细胞
用不超过1,500 rpm (400 x g) 离心5分钟.弃上清，加入Biozol溶液，漩涡混匀或枪头吸打混匀。然后转移到1.5mL离心管。
对于组织样品
按照样品的类型，选择一个较好的匀浆方法。除了液氮研磨以外，其他匀浆方法可直接在Biozol溶液 中操作。其中对于特殊组织样品如：肝、脾、骨及软骨等需要将Biozol用量加大一倍或是降低样品量。
2.  在室温下，静置两分钟。
3.  每1 mL Biozol 溶液加入0.2倍体积的氯仿（1 mL Biozol Reagent 对应加入0.2 mL 氯仿），盖好盖，用手剧烈震荡15秒。
4.  4^oC 下12,000 xg 离心3 分钟。溶液分为酚氯仿相、中间相和上层水相。RNA溶解在水相中。
5.  转移不超过80%的水相到一个干净的离心管，然后加入0.5倍体积的异丙醇(96-100%,室温)，漩涡充分震荡15秒。
6.  4^oC 下12,000 x g 离心10 分钟，离心后试管底部将出现沉淀。
7.  RNA沉淀的清洗：沿管壁轻轻加入1mL 75%的乙醇（防止加入乙醇时冲散沉淀），用手轻轻震荡离心管洗涤沉淀。7500×g离心5分钟，弃上清，尽量去除残留乙醇，这样可以减少盐离子污染。
8.  重复第7步。
9.  RNA的溶解：室温晾干或真空干燥，（不要过于干燥，否则RNA很难溶解）然后加入30-50 µL DEPC 水溶解RNA，待沉淀完全溶解后于-80℃保存。