抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC) ，是生物机体通过抗体清除感染、癌变或衰老细胞的主要途径，也是目前抗体药物药效评价的重要手段之一。ADCC 广泛应用于抗体新药研发和改造，仿制药开发和研发过程中抗体质量及功能的分析，同时在生物药和免疫调节药物的临床试验中，ADCC 活性也是 ex vivo 检测指标之一。
 

我们都知道，单克隆抗体是由两条重链（H 链）和两条轻链（L 链）通过共价键和非共价键联合形成的生物大分子，每条链又由抗原结合部位 (Fab) 和恒定区 (Fc) 组成。抗体药物在体内主要有两类的生理活性：一是通过 Fab 识别并专一性结合抗原物质，同靶标抗原中和或促使细胞凋亡；该生理活性的作用依赖于抗体 Fab 与抗原的亲和力。二是抗体 Fc 可与 NK 细胞（效应细胞）表面的 FcγRIIIa(CD16) 结合，介导 ADCC 作用。因此，抗体 Fab 的修饰会影响抗体抗原的亲和力，从而改变抗体的中和效应；而抗体 Fc 的修饰也会对抗体的 ADCC 效应造成影响。
 

上图：ADCC 效应示意图

研究发现，NK 细胞表面的 FcγRIIIa(CD16) 具有遗传多态性，该多态性存在于近膜端 IgG 结合结构域第 158 位，缬氨酸 (V) 可被苯丙氨酸 (F) 取代。人 IgG 同 FcγRIIIa-V158 相比 FcγRIIIa-F158 与人具有更高的亲和力，可更有效介导 ADCC 作用，临床研究表明，FcγRIIIa 基因多态性与肿瘤病人的预后有关。因此，FcγRIIIa-V158 型 NK 细胞 FcγRIIIa-F158 型 NK 细胞更加有利于 ADCC 实验的开展，而 FcγRIIIa-V158 相比 FcγRIIIa-F158 基因频率较低，妙顺生物 TPCS 提供供体 FcγRIIIa 基因分型测试与筛选服务，研究者可选择 FcγRIIIA-158V/V 分型的 PBMC 或 NK 细胞分离服务以便或的良好的 ADCC 实验效果。
 

上图：TPCS 供体 FcγRIIIa 基因分型测试与筛选服务部分数据
*Lot No 仅供参考，联系我们获取数据信息

 

ADCC 实验过程包括三个重要组成部分：抗体（单抗药物）、效应细胞（PBMC 细胞或 NK 细胞）和靶细胞。靶细胞种类、效应细胞的选择与检测靶细胞活性是保证实验成功的关键。效应细胞的选择一般使用外周血单核细胞 (PBMC) 或自然杀伤细胞（NK 细胞）。相比 PBMC 细胞作为效应细胞，NK 细胞中抑制性免疫细胞比例更低，选择 NK 细胞通常可使 ADCC 效应作用更强。为了获得良好的实验数据，您可选择 TPCS 品牌 PBMC 分离服务进一步分离 NK 细胞或直接选择 NK 细胞分离服务。

受供体免疫状态影响，不同供体 NK 细胞比例差异较大，直接影响 NK 自 PBMC 的分离得率。为了降低不同供体免疫状态的影响，妙顺生物 TPCS 提供供体预筛服务-利用流式细胞术检测供体体内 CD56+细胞比例，研究者可根据 NK 细胞比例需求挑选合适的供体进行 PBMC 分离服务。同时，妙顺生物 TPCS 提供除 CD56+外多种免疫标志物预筛服务。
 

上图：142 例 TPCS 新鲜 PBMC 分离服务中 NK 细胞比例

 

上图：206 例 TPCS 冻存 PBMC 分离服务中 NK 细胞比例

 

在实验开展过程中，妙顺生物 TPCS 利用 Raji 作为靶细胞，PBMC 作为效应细胞，利妥昔单抗药物开展 ADCC 实验，发现在同一 ADCC 实验体系下并非所有供体来源的 PBMC 细胞或 NK 细胞均能获得良好的 ADCC 效应，同 Raji 空白组相比，部分供体来源的 PBMC 在未有利妥昔单抗药物存在时杀伤水平较高，部分供体来源的 PBMC 在利妥昔单抗存在时杀伤水平较低。妙顺生物 TPCS 认为除与 PBMC 中 NK 细胞比例有关外，还与不同供体 NK 细胞胞内穿孔素、颗粒酶及其他细胞信号通路的转录或表达水平有关。为了减少 PBMC 对于 ADCC 实验开展的影响，妙顺生物 TPCS 提供 ADCC 效应验证的 PBMC 预筛服务，为抗体药物 ADCC 实验筛选出适用于 ADCC 实验的 PBMC。
 

上图：TPCS 品牌 ADCC 预筛服务部分数据展示

为了确保广大科研工作者项目顺利进行，妙顺生物 TPCS 持续为细胞治疗研发、抗体药物研发的科学家们提供免疫细胞分离服务，涵盖 Leukopak、PBMC、T 细胞、NK 细胞、单核细胞等细胞分离服务，欢迎来电咨询。联系方式：021-64169739。

妙顺（上海）生物科技有限公司（Milestone Biotechnologies）作为民族品牌细胞服务商，开展进口替代工作，解决我国生物医药产业的「卡脖子」环节，致力于成为细胞与基因治疗领域内一站式服务提供商。TPCS 是妙顺生物旗下细胞分离服务品牌，为用户提供免疫细胞分离服务、肝细胞分离服务及解决方案。原代细胞分离服务优势：依据项目需求提供样本解决方案、严格的样本分离和质检、提供样本冷链运输全程的温控记录。

 

参考文献： 

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• 2、Koene H R , Kleijer M , Algra J , et al. Fc gammaRIIIa-158V/F polymorphism influences the binding of IgG by natural killer cell Fc gammaRIIIa, independently of the Fc gammaRIIIa-48L/R/H phenotype.[J]. Blood, 1997, 90(3):1109-1114.

• 3、Natsume A ,  Niwa R ,  Satoh M . Improving effector functions of antibodies for cancer treatment: Enhancing ADCC and CDC[J]. Drug Design, Development and Therapy, 2009, 3(3):7-16.

• 4、Kubota T ,  Niwa R ,  Satoh M , et al. Engineered therapeutic antibodies with improved effector functions[J]. Cancer Science, 2009, 100(9).